尽管定语从句和同位语从句在结构形式上以及它们在句子中的位置安排上展现出高度的相似性，但它们在句法功能上存在本质差异，并且所使用的引导词汇也并非完全一致。
1. 定语从句本质上属于形容词性质的从句，其句法作用相当于一个形容词，与前面的名词形成修饰与被修饰的关系，具体表现为对前面名词的范畴进行限定，或者在特定情境下补充说明信息；而同位语从句则属于名词性从句，其功能相当于一个名词，与前面的名词建立同位关系，主要是对前面名词的内容进行进一步的阐释和说明。例如：
The news that he informed me about just now is factual.
他刚才告知我的消息是真实的。（定语从句）
The news that I have successfully passed the exam is factual.
- 我成功通过考试这一消息是确凿的。（同位语从句）
2. 同位语从句与其所修饰的名词之间建立起一种同位关系，二者在逻辑层面上呈现出系表关系，这种关系可以通过“主 系 表”的结构形式来具体表达，而定语从句则不具备这种逻辑关联。例如：
The news that he secured the first prize is accurate.
他获得冠军的消息是准确的。（同位语从句）
若采用“主 系 表”的结构形式来表述，则呈现为：
The news is that he secured the first prize. 那条消息的内容是他赢得了冠军。
3. 定语从句的先行词可以是各类不同的名词，而能够跟同位语从句的名词通常仅限于 news，idea，fact，promise，question，doubt，thought，hope，message，suggestion，possibility 等少数几个名词。因此，引导这两种从句的连接词也呈现出不完全相同的特征。可以引导定语从句的连接词包括 that，which，who，whom，whose，when，where，why 等。可以引导同位语从句的连接词则有 that，whether，when，where，how 等。
例如：
The factory which / that we toured yesterday is an industrial facility.
我们昨天参观的那家工厂是一家化工厂。（定语从句）
I’ve come from Mr Wang with a communication that he will be unable to visit you this afternoon.
我从王先生那里了解到一个信息，他今天下午无法来看你。（同位语从句）
4. 定语从句的引导词在从句中扮演着特定的句子成分角色，可能作主语、宾语、状语等；而同位语从句中的引导词主要起到连接作用，并不承担任何句子成分的功能。例如：
The concept that he proposed intrigues numerous individuals.
他提出的观点引起了众多人的兴趣。（定语从句， that 在从句中作 gave 的宾语） The reality that they failed to complete the task must be confronted.
必须正视现实，他们没有完成工作。
（同位语从句， that 在从句中仅起连接作用，引导从句解释 fact 的内容，不构成任何句子成分）
5. 引导定语从句的连接词在某些情况下可以省略，而引导同位语从句的连接词则不能省略。例如：
I’ll honor the commitment （that / which） I made three years ago.
我将信守三年前做出的承诺。（定语从句）
I make a vow that I will correspond with you as soon as I arrive in Beijing.
我发誓，我一到北京就给你写信。（同位语从句）
6. when，where 和 why 在引导定语从句和同位语从句时，它们的共同之处在于引导词在这两种从句中都可以充当状语。然而，定语从句前通常存在相应的先行词，这些先行词分别是表示时间、地点和原因状语的名词，而同位语从句前则没有相应的名词。例如：
I still recall the day when （=on which） I first set foot in Beijing.
我仍然记得我第一次来到北京的那一天。（定语从句）
I have no knowledge of when she will return.
我不知道她何时才会回来。（同位语从句）