材料准备
1. 样品：需要提取DNA的生物样本，如血液、植物叶片、动物等。
2. 缓冲液A：0.4M NaCl，pH 8.0。
3. 缓冲液B：0.4M NaCl，pH 8.0，含1% CTAB。
4. PVPP：聚乙烯吡咯烷酮，用于去除蛋白质。
5. 酚/氯仿/异戊醇 (25:24:1)：用于DNA的溶解。
6. 无水乙醇：用于沉淀DNA。
7. 70%乙醇：用于洗涤DNA。
8. TE缓冲液：10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA，pH 8.0。
9. 无菌吸头和离心管：用于操作和储存DNA。
实验步骤
1. 样品处理
– 将样品置于冰上，用无菌吸头吸取适量的缓冲液A，加入含有PVPP的离心管中。
– 加入等体积的缓冲液B，轻轻混匀，然后加入几滴酚/氯仿/异戊醇溶液，轻轻震荡以混合。
– 10,000 rpm离心5分钟，小心地将上层清液转移到新的离心管中。
– 重复上述步骤一次，以进一步去除蛋白质。
2. DNA沉淀
– 向含有DNA的上清液中加入等体积的70%乙醇，轻轻混匀。
– 10,000 rpm离心5分钟，小心地将DNA沉淀在管底。
– 弃去上清液，用70%乙醇洗涤DNA沉淀两次。
3. DNA溶解
– 将DNA沉淀转移到一个新的离心管中，加入TE缓冲液，轻轻震荡至DNA完全溶解。
– 可以在室温下静置10分钟或在65℃水浴中加热10分钟以帮助DNA溶解。
4. DNA纯化
– 使用酚/氯仿/异戊醇溶液再次溶解DNA，然后10,000 rpm离心5分钟。
– 小心地将上层清液转移到新的离心管中，重复此步骤一次。
– 将两个离心后的上清液合并，加入等体积的异丙醇，轻轻混匀。
– 10,000 rpm离心5分钟，小心地将DNA沉淀在管底。
– 弃去上清液，用70%乙醇洗涤DNA沉淀两次。
5. DNA洗涤和干燥
– 将DNA沉淀转移到另一个干净的离心管中，加入等体积的70%乙醇。
– 10,000 rpm离心5分钟，小心地将DNA沉淀在管底。
– 弃去上清液，将DNA沉淀在空气中自然干燥几分钟。
– 将干燥的DNA转移到一个新的离心管中，加入适量的TE缓冲液溶解。
6. DNA浓度和质量检测
– 使用紫外分光光度计测量DNA的浓度和纯度。
– 通过琼脂糖凝胶电泳检查DNA的大小和形态。
注意事项
1. 确保所有操作都在无菌条件下进行。
2. 避免RNA污染，因为RNA会干扰DNA的提取。
3. 使用适当的缓冲液和试剂来确保最佳的DNA提取效果。
4. 如果样品中含有大量的蛋白质或其他杂质，可能需要先进行蛋白酶K消化或酚/氯仿/异戊醇抽提。
5. 注意实验安全，佩戴适当的实验室防护装备，如手套、口罩和护目镜。